شهد فرع الاحياء المجهرية في كلية الطب البيطري / جامعة بغداد مناقشة اطروحة الدكتوراه الموسومة (عزل وتوصيف المكورات المعوية متعددة المقاومة للمضادات الحيوية المسببة لألتهاب الضرع في الابقار في محافظة كركوك: دراسة التعبير والتغاير الجيني ) للطالبة مروة حسين عبدعلي .
هدفت هذه الدراسة لعزل وتوصيف المكورات المعوية متعددة المقاومة للمضادات الحيوية المسببة لألتهاب الضرع في الابقارللفترة من تشرين الثاني2021 إلى أيار 2022 . تضمنت هذه الدراسة عدة أجزاء. تمثل الجزء الاول التحقيق في مرض التهاب الضرع السريري في الأبقار والبكتيريا المسببة للمرض في حقول ومناطق محافظة كركوك/ العراق ، ثم اختيار والتركيز على بكتيريا المكورات المعوية ، وخاصة النوع E. Faecalis والنوع E. Faccium ، وتقييم مدى انتشارها في حليب الأبقار المصابة بالتهاب الضرع السريري من خلال جمع 300 عينة من الحليب من الأبقار المصابة، بعض عينات الحليب المأخوذة كانت تحتوي على دم. الجزء الثاني التحري عن البكتريا المسببة للمرض واختيار فقط بكتريا المكورات المعوية Enterococcus spp. ثم اجراء عمليات العزل وتعريف المكورات المعوية عن طريق إجراء فحوصات بكتريولوجية للمعزولات ، وكانت نتائج العزل الأولية عن طريق الزراعة على الوسط الانتقائي. (Bile Esuline Azide Agar BEAA) 81 معزولة تعود ل .Enterococcus spp بنسبة (27٪). و 115 معزولة تعود ل بكتريا E.coli بنسبة (38 %). و104 معزولة تعود ل بكتيريا ال Staphylococcus spp. بنسبة (34,6%). أجريت الاختبارات البيوكيميائية التفريقية لتحديد المكورات المعوية على مستوى الجنس، ثم باستخدام تفاعل البوليميراز التأكيدي.
أظهرت النتائج أنه تم تأكيد 25 عينة تنتمي إلى جنس E. faecalis بنسبة 8% ، وما مجموعه 10 عزلات تنتمي فقط إلى جنس E. faecium بنسبة 3%. أما الجزء الثالث في المختبر، تم إجراء اختبارات حساسية للمعزولات المؤكدة للتعرف على معايير مقاومة المضادات الحيوية المستخدمة في علاج التهاب الضرع والتي يمكن أن تقاومها هذه الجراثيم. تم استخدام 11 قرصًا مختلفًا من المضادات الحيوية من خلال توزيعها على Müller – Hilton Agar ، أظهرت النتائج مستوى متعدد وعالي من المقاومة للمضادات الحيوية كما يلي بالنسبة لـ E. faecalis كانت مقاومة عالية للمضادات الحيوية. أظهرت نتائج اختبار الحساسية مستوى عالي من المقاومة للمضادات الحيوية كما يلي: سيفوكسيتين 70٪ ، أزيثروميسين وستربتومايسين 60٪ ، تتراسيكلين وفلورفينيكول 50٪ ، سيبروفلوكساسين 40٪ ، كلورامفينيكول ، جنتامايسين وفانكومايسين 30٪ وكلافوليسين. حمض 20٪. الجزء الرابع بناءً على نتائج اختبار الحساسية ، تم اختيار أكثر ستة عزلات من بكتيريا E. faecalis ، والتي أعطت مستوى مقاومة عالي ومتعدد للأدوية ، وكذلك لعزلات E. faecium ، تم اختيار أكثر 4 عزلات أعطت مستوى عاليًا من المقاومة للمضادات الحيوية. أظهرت النتائج أن جميع عزلات E. faccalis تحتوي على 4 جينات مقاومة لمضادات الميكروبات على الأقل قد تم فحصها جميعًا ، وتم اكتشاف جينات tetK و norA و aac (6 ‘) aph (2 “) في جميع ستة عزلات موجبة من E. faecalis بنسبة 100٪ تم الكشف عن جين VanA في اثنين من عزلات E. faecalis ، وتم الكشف عن جين vanB في عزلة واحدة فقط من E. faecalis. تم الكشف عن جين blaz في خمسة من عزلات E. faecalis. تم الكشف عن جين mphC. في اثنين من عزلات E. faecalis ، وتم الكشف عن جين FexA في اثنين من عزلات E. faecalis. أما بالنسبة ل E. faecium ، فقد أظهرت النتائج أن جينات المقاومة norA و tetk و aac (6 ‘) aph (2 “) وجدت في جميع تم العثور على عزلات E. feacium بنسبة100٪ ، و mphC و VanA بنسبة 50٪ ، و blaZ و vanB بنسبة 25٪ ، على الرغم من انه لم يتم العثور على جينات fexA المسؤولة عن مقاومة E. faecium للفينيكولات في أي من عزلات E. faecium الاربعة المفحوصة ( عدد معزولات ال E. faecium المستخدمة في فحص PCR للتحري عن جينات المقاومة فيها, هي فقط 4 من اصل 10). تضمن الجزء الخامس إجراء التسلسل والتحليل الجيني لكل من النوعين المحليين E. faecalis و E. faecium. تم ارسالها الى مركز الدقي للدراسات البيولوجية في القاهرة عن طريق البريد الالكتروني, للتعرف على نسبة التشابه مع المعزولات العالمية المسجلة في بنك الجينات العالمي . عند إجراء إجراء تسلسلي على عزل (رقم 8) من E. faecium ، وعزلة (رقم 2) من E. faccalis ، التي أعطت درجة عالية من المقاومة المتعددة ضد المضادات الحيوية ، وأظهر من خلال نتائج فحص PCR أن يحمل عوامل مقاومة متعددة. تم إنشاء شجرة النشوء والتسلسل المتعدد من التركيب الوراثي المحلي لعزلة E. faecium وكذلك لعزلة E. faecalis المعزولة من حليب البقر في العراق. تم تسجيل المتواليات الجينية وأشجار النشوء والتطور لعزلات E. faecalis و E. faecium في Gen – bank – NCBI. حصلوا على رقم المدخل (OP566382) ل E. faecium و (OP566380) ل E. faecalis. أما بالنسبة لتسلسل E. faecium ، فقد تم تحليل نتائج تسلسل E. faecium من قبل NCBI لمعرفة الاختلاف الجيني. اظهرت النتائج أن الجينوم المحلي ل E. faecium قريب من العزلات القياسية العالمية المسجلة لـ E. faecium بنسبة 97-100 ٪ مقارنة مع العزلات السابقة المسجلة في Gen Bank NCBI
أستنتجت هذه الدراسة أن انتشار المكورات البرازية المقاومة للمضادات الحيوية في بيىة وحقول محافظة كركوك وايضا تسسبها في مرض التهاب الضرع الظاهري في الابقار بشكل ملحوظ وايضا ان المضاد الحيوي الاوكمنتينين المزيج من ( الاموكسليين + كلافيولنك اسيد) مفيد وفعال اكثر من بقية المضادات المستخدمة لعلاج مرض التهاب الضرع في الابقار بكميات مناسبة وضمن فترة علاج كافية للقضاء التام على الجراثيم. وايظا من من خلال التحليل الجيني للمعزولات المحلية تم تحليلها وتسجيلها في بنك الجينات العالمي واصبحت مرجع للعراق والشرق الاوسط والعالم وتم اكتشاف تشابهها مع المعزولات القياسية العالمية المسجلة في بنك الجينات العالمي بنسبة 97-100%.
