شهد فرع الأحياء المجهرية في كلية الطب البيطري / جامعة بغداد مناقشة اطروحة الدكتوراه الموسومة (الكشف عن دور الالبيزا ليبك كمعدل مناعي ضد الكليبسيلا الرئوية) للطالبة أديان عبد الرزاق داخل .
هدفت هذه الدراسة التحقيق في قدرة المستخلص النباتي كمعدل مناعي لتقليل ضراوة بكتيريا الكليبسيلا الرئوية، والتي تعد من أكثر الكائنات الدقيقة المعزولة من الالتهابات المختلفة، سواء في المختبر أو في الكائن الحي . تضمنت هذه الدراسة ستة محاور حيث شمل المحور الأول عزل وتحديد الهوية الجزيئية لبكتيريا الكليبسيلا الرئوية من حالات سريرية مختلفة، مع استخدام العزلات المقاومة للعديد من الأدوية (MDR) لاحقًا. تمت دراسة توزيع الكليبسيلا الرئوية في ثلاثة مجالات محلية في المثنى، العراق، بين مارس ويونيو 2022. حيث تم جمع ما مجموعه 114 مسحة (أنفية، مستقيمية) وعينة بول من 64 حيوانًا مصابًا بالإسهال والإفرازات الأنفية و50 مريضًا من كلا الجنسين والأعمار يعانون من التهاب المسالك البولية. تم عزل وتحديد الكليبسيلا الرئوية باستخدام الطرق التقليدية متبوعة بنظام VITEK®2 وتأكيدها عن طريق تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) المستهدف لجين rRNA. 16تم التحقيق في عوامل الضراوة التي تمثل جينات المقاومة. تم الكشف عن أربعة جينات مقاومة، بما في ذلك جينات blaOXA48 و qnrB و Sul1 و aac(6′)-Ib-. ثم تمت دراسة نمط الحساسية للمضادات الميكروبية بطريقة انتشار القرص.
المحور الثاني من الدراسة هو صنع مستخلص إيثانولي من النبات، بما في ذلك: أوراق ألبيزيا ليبيك (L.) Benth. أنتج المستخلص الإيثانولي النباتي منتجًا عجينيًا أخضر داكنًا، وكانت نسبة الاستخلاص (3.25٪). ثم تم استخدام كروماتوغرافيا الغاز-مطياف الكتلة (GC-MS) لتحديد المكونات النشطة بيولوجيًا في الدراسات النباتية.
المحور الثالث تضمن دراسة قدرة المستخلص النباتي كعامل مضاد للبكتيريا مقارنة بالمضادات الحيوية اذ تم استخدام طريقة الانتشار في حفر الأجار. أظهرت النتائج نجاح المستخلص النباتي في تثبيط نمو بكتيريا الكلبسيلا الرئوية بالمقارنة مع تثبيط المضادات الحيوية، مما أكد قدرة هذا المستخلص النباتي كمثبط للبكتيريا الممرضة.
المحور الرابع: تحديد تأثيرات مستخلص الالبيزا ليبك على التعبير الجيني حيث أظهر تفاعل البوليميراز المتسلسل الكمي في الوقت الحقيقي تعزيزًا واضحًا وإضعافًا تدريجيًا لجين IL-2 (جين تنظيم الالتهابات) في الحمض النووي الريبي المكمل للحيوانات المحصنة مقارنة بمجموعة التحكم غير المحصنة (PBS). ومع ذلك، أشارت النتائج إلى أن متوسط التعبير الجيني لـ IL-2 كان أعلى بشكل ملحوظ في مجموعات KWCSA-KP مستضد الخلايا الكاملة المقتولة المجزاة بالصوت و الالبيزا KWCSA-KP + مستضد الخلايا الكاملة المقتولة المجزاة بالصوت مقارنة بمجموعات الالبيزا والتحكم عبر جميع الفترات الزمنية.
المحور الخامس: دراسة تأثير المستخلص النباتي على الحيوانات المحصنة (في الجسم الحي) تمت دراسة قدرة مستخلص الالبيزا ليبك كوقاية وعلاج ضد الكلبسيلا الرئوية في الأرانب من خلال تقدير التغيرات المناعية (ELISA لـ IL-4 و IgG) والدموية (تعداد الدم الكامل، CBC) قبل وبعد تحصين الأرانب بالمستخلصات و KWCSAg-KP او بمستضد الخلايا الكاملة المقتولة المجزأة بالصوت للكلبسيلا الرئوية .
تضمنت التجربة 5 مجموعات من الأرانب، كل منها تحتوي على 8 حيوانات . المجموعة الأولى تم تحصينها تحت الجلد بـ 1000 ميكروغرام/مل من KWCSAg-KP.المجموعة الثانية تلقت جرعة من مستخلص Albizia lebbeck بمعدل 300ملغ /كغ من وزن الجسم عن طريق الفم، مع تحصين تحت الجلد بمعدل 1000ميكروغرام/مل من KWCSAg-KP.المجموعة الثالثة تلقت جرعة من مستخلص Albizia lebbeck بمعدل 150)ملغ/كغ) من وزن الجسم عن طريق الفم، مع تحصين تحت الجلد بـ 1000 ميكروغرام/مل من KWCSAg-KP.المجموعة الرابعة او السيطرة الموجبة تم إعطاؤها جرعة من مستخلص Albizia lebbeck (300 ملغ/كغ) من وزن الجسم عن طريق الفم فقط.المجموعة الخامسة: مجموعة السيطرة السالبة، تم إعطاؤها PBS.
المحور السادس من الدراسة تضمن فحص التغيرات النسيجية المرضية في الكبد والكلى والأمعاء والطحال لتحديد تأثير جرعة التحدي من بكتيريا Klebsiella pneumoniae. تم إعطاء تركيزات مختلفة من المستخلصات الإيثانولية لـ Albizia للحيوانات التي تم تلقيحها بمستضد K. pneumoniae المجزأ بالصوت، مقارنة بالمجموعة غير المحصنة.
أظهرت نتائج هذه الدراسة بأنها حافظت جرعات Albizia البالغة 300 و150 ملغ/كغ على وظائف الأعضاء الداخلية بشكل مماثل لمجموعة التحكم غير المحصنة. وكانت التغيرات النسيجية في حيوانات التجربة كما يلي:. تسلل خفيف للخلايا الالتهابية في الصفيحة الخاصة, تفريغ خفيف للخلايا الكبدية في المنطقة المركزية الفصيصية و فرط تنسج خفيف للب الأبيض مع لب أحمر طبيعي.في المقابل، أظهرت مجموعة التحكم احتقانًا في الأوردة الكبدية بشكل رئيسي في المناطق البابية والمركزية الفصيصية، والتهابًا جسريًا بين هاتين المنطقتين، وفرط تنسج شديد للب الأبيض مع ترسب الهيموسيدرين في اللب الأحمر.في النهاية أظهر كل من KWCSA-KP والمستخلص الإيثانولي لـ Albizia تأثيرات قوية على تعديل الاستجابات المناعية التي تنظمها الاستجابات المناعية الخلوية والخلطية.
أستنتجت هذه الدراسة أن معظم سلالات كليبسيلا الرئوية التي تسبب الاسهال في الأغنام مقاومة لعدة أدوية وال etrapenem هوالمضاد الحيوي الأكثر فعالية ضد جميع السلالات المقاومة . كذلك أظهرت الدراسات الحية أن مستخلصات من شجرة الألبزيا تمتلك خصائص مناعية مما قد يؤثر على كل من الاستجابات المناعية الخلوية والمناعية المصلية من خلال زيادة إنتاج الغلوبولين المناعي والسيتوكين مقارنة بمجموعة التحكم. أوصت هذه الدراسة بمزيد من الاستكشاف لأجزاء أخرى من مستخلص النبات المذكور، مثل الساق والبذور، ودراسة نشاطاتها العلاجية
